中药学论文_基于RANKL/OPG探讨桂枝芍药知母汤
文章摘要:目的：基于大鼠卵巢切除术（OVX）联合糖皮质激素注射致骨质疏松模型研究桂枝芍药知母汤（GSZT）对骨质疏松症（OP）模型SD雌鼠的治疗作用。方法：OVX手术1周后，除假手术组外，大鼠分为5组：OP模型组、骨化醇组(阳性药，0.1 mg·kg-1)，GSZT低、中、高剂量组(0.8，1.6，3.2 g·kg-1)。除假手术组，大鼠肌肉注射地塞米松(1 mg·kg-1，2次/周)，连续6周；给药8周后，处死动物收集股骨样本，微计算机断层扫描（Micro CT）扫描股骨远端1/3，检测骨矿物质密度（BMD），骨体积（BV），组织体积（TV），结构模式指数（SMI），骨小梁连接密度（Conn.D），骨小梁数目（Tb.N），骨小梁厚度（Tb.Th），和骨小梁分离度（Tb.Sp）。采用苏木素-伊红（HE）染色法和马松（Masson）染色检查股骨组织病理学改变。采用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色分析骨组织中破骨细胞。采用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测骨组织基质金属蛋白酶-9（MMP-9），组织蛋白酶K（CTSK），抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRAP5b）的含量；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测骨组织中核转录因子-κB受体活化因子配体（RANKL），骨保护素（OPG），碱性磷酸酶（ALP），骨碱性磷酸酶（BALP）蛋白含量。结果：与正常组比较，OP模型大鼠骨松质部位骨小梁数量明显减少，间距增宽，厚度变薄，连续性差；与模型组比较，GZSD中、高剂量组对股骨骨松质的骨小梁改变均有改善作用。Masson染色表明与正常组比较，OP模型组股骨远端骨骺生长板厚度变薄，新生骨面积变小，骨化醇及GZSD高剂量组可抑制新生骨的减少。TRAP染色结果表明，与正常组比较，OP组破骨细胞数目明显增加，与模型组比较，GZSD中高剂量组可减少OP大鼠破骨细胞数量。Micro CT结果表明，与正常组比较，OP大鼠BMD，BV，Tb.N，Tb.Th和Conn.D减小，SMI和Tb.Pf显著升高（P<0.01）；与模型组比较，GZSD中、高剂量可改善OP大鼠骨质疏松程度，BV，Tb.N显著升高，SMI，Tb.Pf显著降低（P<0.01）。ELISA结果表明，与正常组比较，OP模型组ALP含量显著减少（P<0.01），MMP-9，TRAP5b和CTSK显著增多（P<0.01）；与模型组比较，GSZD高剂量ALP含量显著升高（P<0.01），MMP-9，TRAP5b和CTSK显著减少（P<0.01）。Western blot结果表明，与模型组比较，骨化醇组及GSZD高剂量组均抑制RANKL基因的表达（P<0.05），提高OPG表达（P<0.05）。结论：本研究表明GZSD对OVX联合激素引起的大鼠骨质疏松具有治疗作用，其机制与调节RANKL，OPG相关，为其进一步的临床应用和现代制剂开发奠定了一定基础。
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