三种麻醉药对雄性小鼠体表心电图的影响
由于哺乳动物的基本生命过程具有的共性特征使得医学实验中探索生命过程的反应可以部分利用实验动物来替代。然而,不同种属的动物又存在各自的生理特点,其对药效学、药代动力学、毒性等各项反应存在差异,因此只有熟悉并掌握动物的这些差异,才能获得真实的动物实验结果[1],并将其有效的运用于人类疾病的替代研究中。
心电图描记在生物及医学实验研究中是一种常用的方法。然而由于动物大多数无法配合检测,强制性束缚又会导致心电观察不准,因此多数情况下动物是在麻醉状态下进行心电观测[2]。这就需要考虑不同麻醉药由于其作用机制不同,动物对其反应性所产生的差别[3],以防止由于麻醉药物的本底影响而导致的实验偏差甚至错误。
本课题组在前期的实验研究中关注到,部分麻醉药作用的小鼠心电波形与麻醉时长存在一定的相关性。因此设计了本实验,以C57BL/6雄性成年小鼠为试验对象,探讨了三种常见动物麻醉药对小鼠心电图的影响,探寻对小鼠心电干扰因素较低的麻醉药及恰当的数据采集时间,以期为环境安全、生命科学及医学研究中涉及小鼠心电图的初步观察提供一定的参考依据,降低因麻醉药使用或观测时间点的选取不当造成的实验失败。
1 材料和方法
1.1 实验动物
SPF级C57BL/6雄性成年小鼠24只,10~12周龄,体重25~32 g,小鼠购自南京大学模式动物研究所[SCXK(苏)2015-0001],按照标准操作规程饲养于清洁级ICV动物房中[SYXK(苏)2014-0052], 自然光照、恒温20℃ ~ 22℃、恒湿60% ~ 70%,自由饮用无菌去离子水,喂养SPF级小鼠维持型饲料(江苏省协同医药生物工程有限责任公司)。所有动物实验符合南京大学医学院附属鼓楼医院实验动物伦理委员会要求。
1.2 主要试剂与仪器
RM6240多道生理信号采集处理系统(成都仪器厂),银针型电极,氨基甲酸乙酯(化学纯,批号:),水合氯醛(分析纯,批号:)购自国药集团化学试剂有限公司,戊巴比妥钠(分析纯,批号:3G223G27)购自生兴生物技术有限公司。药品均使用上海百特医疗用品有限公司购买的0.9%氯化钠溶液(批号:S)进行配置。氨基甲酸乙酯与0.9%氯化钠溶液比例为0.2 g/mL配置成20%的氨基甲酸乙酯溶液;水合氯醛与0.9%氯化钠溶液比例为0.025 g/mL配置成2.5%的水合氯醛溶液;戊巴比妥钠与0.9%氯化钠溶液比例为0.01 g/mL配置成1%的戊巴比妥钠溶液。
1.3 实验方法
1.3.1 实验分组
所有小鼠随机分配为三组,每组8只,分别为: 20%氨基甲酸乙酯组、2.5%水合氯醛组、1%戊巴比妥钠组。
1.3.2 麻醉
所有小鼠实验前禁食12 h。麻醉方式采用腹腔注射麻醉。20%氨基甲酸乙酯溶液麻醉,剂量为7 mL/kg; 2.5%水合氯醛溶液麻醉,剂量为3 mL/kg; 1%戊巴比妥钠溶液麻醉,剂量为10 mL/kg。等待小鼠出现四肢无力,对皮肤疼痛反应消失,判断小鼠已经麻醉完全。
1.3.3 小鼠心电图描记
在干净、光线柔和、无噪音的实验室中,打开 RM6240E多道生理信号采集处理系统及计算机。
将小鼠以仰卧位置于38℃(小鼠正常体温)保温实验台上将3 根银针电极分别插入小鼠脚踝皮下,注意针头与电极的连接须十分紧, 针头切勿插入肌肉(以防出现肌电波)。选择II导联(按照右上肢绿色,左下肢红色,右下肢黑色的顺序,连入 RM6240E多道生理信号采集处理系统,参数设定:扫描速度为40 ms/div,灵敏度为500 μV,连续记1 h的心电图数据,进行统计分析。
RM6240E多道生理信号采集处理系统连续记录心电波形,从初始记录开始,每隔 5 min 读取心率一次,每次记录时间为 10 s;每隔 10 min读取一次 PR间期,QRS群宽度,P波振幅,选择每个时间段中基线平稳的连续5个心搏,分别取其平均值为该时段相应参数测量值。
1.4 统计学处理
用Prism统计软件对各项指标进行处理,组间比较用t检验。以P<0.05 为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 不同麻醉药作用小鼠心电图波形表现
三种不同麻醉药作用于小鼠连续观察1 h,比较初始心电图波形与40 min后波形改变情况,由表1可发现,水合氯醛组心电图波形变化主要表现为间期随时间延长;戊巴比妥钠组呈现出两种主要波形,4只表现为S波较深型,4只变现为S波较浅型,且两种波形均表现为间期随时间延长;氨基甲酸乙酯组在初始时的心电图与40 min时的心电图波形基本一致,无明显变化。
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